· polyacrylamidegel yuav tsum los ntawm acrylamide monomer, polymerization pib cov khoom, catalyst, thiab txoj cai ntawm ntsev thiab tsis sib tov ua ke.
· acrylamidethiab BIS (N, N '- methylene ob acrylamide) yog monomer daim ntawv gel matrix.
· ammonium persulfate pib nplaum txheej txheem polymerization.Lub formulation ntawm cov kua nplaum yuav tsum tau 10% ammonium persulfate tov npaj rau hauv dej.Feem ntau ntawm cov ntaub ntawv qhia tias yuav tsum tau siv rau kev siv.Txawm li cas los xij, 10% kev daws teeb meem tuaj yeem muab tso rau ntawm 4 ℃ rau ob peb lub lis piam yam tsis muaj kev poob haujlwm tseem ceeb.Ua kom txog li 10 ml thiab muab pov tseg thaum cov kua nplaum tsis sib sau.
Tswv yim: Qhov feem pua ntawmacrylamidenyob rau hauv sequencing kua nplaum thiab protein kua nplaum tsis yog tib yam.Yog tias siv premade acrylamide: BIS tov, nco ntsoov kom tau txais lub raj mis zoo.
· TEMED (N, N, N', N' - tetramethyl ethylenediamine) yog ib qho catalyst, nyob rau hauv ib lub raj mis xim av, muab tso rau hauv lub tub yees.Ntxiv ua ntej nchuav kua nplaum.
· polyacrylamide electrophoresis siv iav hauv electrophoresis yuav tsum tau ntxuav ua ntej thiab tom qab txhua zaus.Tom qab electrophoresis, ntxuav nrog ib tug mos txhuam thiab daim ntaub nyob rau hauv dej sov soapy, yaug nrog distilled dej thiab sawv ntsug kom qhuav.
· ya raws thiab plua plav tuaj yeem ua rau hollow polymer.Ua ntej electrophoresis, ntxuav lub iav phaj nrog iav ntxuav thiab so nrog ib tug mos txhuam.Ntxuav nrog dej distilled thiab qhuav kom huv si nrog ib daim ntawv so.Yaug nrog 70% ethanol ua ntej so nrog daim ntawv pab ntxuav thiab ua kom qhuav.Ntxiv cov qauv ntawm acrylamide txuas ntxiv: BIS, dej, tsis muaj tshuaj, ammonium persulfate, TEMED.Co zoo thiab ncuav tam sim ntawd.
Nws tsis tsim nyog degass polyacrylamide ua ntej polymerization.(Acrylamide siv los muab tso rau hauv lub tshuab nqus tsev kom tshem tawm npuas vim tias oxygen inhibits polymerization.)
Kab rov tav kua nplaum taw qhia cov lus qhia.
· muab ib daim ntawv dub rau hauv qab lub thawv, cov keeb kwm yav dhau los ua ib co qauv lub qhov kom pom tseeb dua.
· kua nplaum tank puv tsis, dhau lub colloid.
· Yog hais tias ntug muaj lub teeb, tig lub teeb, cia lub teeb ci colloid.Kos tus qauv rau hauv lub pipette.
· siv cov khoom siv pipetting tsis siv neeg.
· hauv 10-200 mu 1 kua txav taw tes tuaj yeem siv rau feem ntau ntawm cov ntsiab lus ntawm cov qauv.Rau cov qauv me me heev (tsawg dua 10μ1), lub taub hau ntev pipette siv rau cov kua nplaum sib txuas yog yooj yim dua.
· pipetting cia li raus rau hauv cov qauv, nqus tau cov dej maj mam txav.Cov qauv yuav zoo li nplaum nrog glycerin, thiab cov twj nrawm nrawm tuaj yeem rub cov npuas rau hauv lub taub hau pipette.
· Cov qauv tom qab nqus cov raj xa dej, yuav txav lub taub hau maj mam rau ntawm ntug ntawm cov yeeb nkab lossis cov ntaub so ntswg nqus cov kua taub hau sab nraum cov tee dej.Ceev faj tsis txhob nqus cov qauv.
Muab cov qauv tso rau hauv lub qhov qauv
· pipetting ntaus ntawv kom lub siab me ntsis, ua rau cov qauv me ntsis txav cov kua taub hau.
· lub taub hau pipetting tso rau hauv qhov tsis, me ntsis siab tshaj qhov chaw qhov, tuav lub siab zoo.Lub taub ntawm lub pipette tuaj yeem muab tso rau hauv ib lub qhov me me.
· maj mam thiab tsis tu ncua cov qauv tawm.Lub pipette taub yog muab tso rau saum lub qhov taw tes qauv qhov, thiab tus qauv yuav tog rau hauv lub qhov.Cia tus qauv dab dej los sau lub qhov qauv es tsis txhob thawb rau hauv.
· ib zaug qhov kawg poob ntawm cov qauv nrog cov kua taub hau, cov kua yuav txav mus rau ob txhais ceg, maj mam tsa cov kua txav, txav tawm ntawm qhov tsis muaj.
Yuav ua li cas ua cov kua nplaum ntsug ntsug?
· ntsug kua nplaum taw tes qauv qhov tsim ntawm ob daim iav.Hauv cov kua nplaum nyias heev, lub taub hau pipette tsis tuaj yeem muab tso rau ntawm ob daim iav.Saib cov glycerin!Muab lub taub hau pipette tso rau ntawm lub qhov qauv thiab cov qauv yuav nkag mus rau hauv lub qhov.
· taw tes qauv ua ntej, nco ntsoov muab qhov ntsug taw tes ntawm polypropylene acyl gel qauv lub qhov yog rinsed huv si.Ntxuav tawm cov unpolymerized acrylamide thiab cov dej uas yuav tshwm sim nyob rau hauv qab ntawm lub qhov qauv.Cov dej tuaj yeem ua rau lub qhov qauv me me.Siv 25ml lossis 50ml syringe thiab 18-gauge koob.Ncuav rau hauv lub electrophoresis tsis thiab ua tib zoo yaug cov qauv qhov.
· nws tuaj yeem pom qhov qauv qhov tsis yooj yim, tab sis tib yam, tus so yog qhov yooj yim.Yog tias muaj qhov ntau dhau, cov qauv tsis tuaj yeem kuaj nrog bromophenol xiav.
Post lub sij hawm: Mar-31-2023